Não é a agregação de príons em si que mata os neurônios, é a presença de príons no citosol, que ativa a – Caspase 3!
Imagem de células vivas da endocitose de SARS-CoV-2 S-RBD-sfGFP em iPSC-CMs. (a) Evolução temporal da imunocoloração e imagem de células vivas após o replantio dos iPSC-CMs. Cardiomiócitos diferenciados foram replantados no dia 14 após a diferenciação e transduzidos com AAV2-DsRed-RAB5A a 1,0–2,0 × 104 vg/célula no dia 21, depois incubados com SARS-CoV-2 S-RBD-sfGFP por 48 h antes da imunocoloração ou 10 min antes da imagem de células vivas no dia 28 após a diferenciação. (b) ACE2-WT-iPSC-CMs transduzidos com AAV2 codificando DsRed-RAB5A foram incubados com SARS-CoV-2 S-RBD-sfGFP por 48 h antes da imunocoloração no dia 28 após a diferenciação com os anticorpos indicados. (c) ACE2-WT-iPSC-CMs foram incubados com SARS-CoV-2 S-RBD-sfGFP por 10 min antes da obtenção de imagens de células vivas no dia 28 após a diferenciação e observados por microscopia confocal. As áreas delimitadas pelos quadrados brancos estão ampliadas no painel direito. (d) ACE2-WT-iPSC-CMs transduzidos com AAV2 codificando DsRed-RAB5A foram incubados com SARS-CoV-2 S-RBD-sfGFP por 10 min antes da obtenção de imagens de células vivas no dia 28 após a diferenciação e observados por microscopia confocal. Cada ponto indicado por uma seta branca ou amarela mostra o mesmo sinal de S-RBD-sfGFP colocalizado com AAV2-DsRed-RAB5A.
Desde o início da pandemia, eu e muitos outros alertamos que a proteína Spike seria capaz de induzir a doença do príon. Infelizmente, houve casos de DCJ após a vacinação contra COVID.
Uma mulher de 64 anos com histórico médico de depressão bipolar e ansiedade apresenta demência rapidamente progressiva, alterações comportamentais, dores de cabeça e distúrbios da marcha aproximadamente uma semana após receber a segunda dose da vacina Pfizer-BioNTech contra COVID-19.
Doença de Creutzfeldt-Jakob esporádica após receber a segunda dose da vacina Pfizer-BioNTech contra COVID-19
Mas como?
Eu hipotetizei que, assim como a proteína Príon, a proteína Spike é uma proteína de superfície. Se houver um erro na criação da proteína Príon, ela é então levada de volta para dentro da célula para ser degradada. Esse processo acontece o tempo todo e, em condições normais, o corpo não tem problema em eliminar a proteína incorreta.
A PrP é uma proteína da membrana plasmática que inicia sua jornada até a superfície celular no retículo endoplasmático (RE). Como muitas proteínas que trafegam pelo RE (12, 13), uma fração substancial da PrP normalmente se dobra incorretamente, é transportada retrógrada para o citosol e degradada pelos proteassomas (14, 15). Vários mutantes de PrP que causam neurodegeneração familiar são tão estáveis quanto a PrP selvagem após a maturação (16, 17), mas têm maior probabilidade de se dobrar incorretamente durante a maturação (18) e, no caso testado, estão mais frequentemente sujeitos a transporte retrógrado (14). No citosol, a PrP geralmente é degradada tão rapidamente que se torna indetectável.
Neurotoxicidade e neurodegeneração quando o PrP se acumula no citosol
https://www.science.org/doi/10.1126/science.1073725
É quando o corpo está sobrecarregado e não consegue destruir as proteínas incorretas que surge a forma patológica da PrP. No entanto, não são os agregados dessa proteína que destroem a célula, mas sim a sua presença no próprio citoplasma.
No entanto, quando a atividade do proteassoma é comprometida, a PrP acumula-se e, por vezes, converte-se numa conformação semelhante à da PrPSc (19). Os inibidores de proteassoma destroem células de neuroblastoma mais rapidamente do que outros tipos de células cultivadas testadas (14), mas a fração de PrP que se converte numa forma semelhante à da PrPSc parece ter pouca influência na toxicidade (19). Aqui, exploramos a relação entre o enovelamento incorreto da PrP, a inibição do proteassoma, a acumulação de PrP no citosol e a neurotoxicidade.
Neurotoxicidade e neurodegeneração quando o PrP se acumula no citosol
https://www.science.org/doi/10.1126/science.1073725
Certo, então sabemos que a presença de muitas proteínas Príons incorretas na célula causa sua morte, mas qual é o mecanismo? Acontece que é a indução de apoptose, causada pela Caspase-3.
Diferentes distúrbios neurodegenerativos, como a doença do príon, são causados por conformadores de proteínas com dobramento incorreto. A proteína príon citosólica (PrP) transfectada reversamente e a PrP expressa no citosol demonstraram ser neurotóxicas. Para investigar o possível mecanismo de neurotoxicidade devido ao acúmulo de PrP no citosol, um mutante de PrP sem o sinal e GPI (CytoPrP) foi introduzido na célula SH-SY5Y. Os ensaios de MTT e azul de tripano indicaram que a viabilidade das células que expressam CytoPrP foi notavelmente reduzida após o tratamento com MG-132. Fenômenos óbvios de apoptose foram detectados nas células acumuladas com CytoPrP, incluindo perda do potencial transmembrana mitocondrial, aumento da atividade da caspase-3, mais células com dupla coloração positiva para anexina V/PI e redução do nível de Bcl-2.
A proteína priônica citosólica induz apoptose na célula neuronal humana SH-SY5Y por meio da via de disrupção mitocondrial
https://www.bmbreports.org/journal/view.html?volume=42&number=7&spage=444
E, assim como a proteína príon, a proteína Spike (RBD) é translocada da superfície da célula para o citosol.
Para visualizar melhor a endocitose de S-RBD nos iPSC-CMs usando imagens de células vivas, geramos um vírus adenoassociado (AAV), codificando uma sequência RAB5A humana completa fundida com DsRed N-terminal, acionada pelo promotor CMV (AAV2-DsRed-RAB5A). Selecionamos o sorotipo AAV2, pois demonstrou-se que o AAV2 transduz eficientemente os iPSC-CMs42,43. ACE2-WT-iPSC-CMs foram transduzidos com AAV2-DsRed-RAB5A, incubados por 5 a 7 dias e tratados com S-RBD-sfGFP (Fig. 3a). A imunocoloração confirmou que os sinais de S-RBD-sfGFP colocalizaram-se com DsRed-RAB5A nos ACE2-WT-iPSC-CMs (Fig. 3b). A observação sequencial de cardiomiócitos positivos para S-RBD-sfGFP usando microscopia confocal demonstrou que S-RBD-sfGFP estava ligado à membrana celular, colocalizado com DsRed-RAB5A e entregue ao citosol (Fig. 3c, d e Vídeo Suplementar).
O domínio de ligação ao receptor de pico do SARS-CoV-2 é internalizado e promove a ISGilação de proteínas em cardiomiócitos derivados de células-tronco pluripotentes induzidas por humanos
https://www.nature.com/articles/s41598-023-48084-7
Agora, para completar o quebra-cabeça, sim, é o Spike RBD que ativa a Caspase-3.
Também observamos níveis significativamente elevados de cálcio intracelular e taxas de apoptose no endotélio vascular pulmonar após o tratamento com S-RBD, refletidos pelo aumento dos níveis de cinase dependente de cálcio fosforilada (p-CaMKII) (Fig. 4g, h) e aumento dos níveis de imunorreatividade da caspase 3 clivada (Fig. 4i, j) na região positiva do marcador específico de células endoteliais CD31 dos vasos pulmonares.
O domínio de ligação ao receptor da proteína spike do SARS-CoV-2 perturba a homeostase do cálcio intracelular e prejudica as células endoteliais vasculares pulmonares
https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC10349149/
A Proteína Spike é uma excelente mimetizadora. Ela é capaz de induzir os MECANISMOS de praticamente todas as doenças fatais do envelhecimento. Como mencionei anteriormente, não estamos observando um aumento nas doenças autoimunes x, y ou z, ou nas doenças cardiovasculares a, b ou c, ou no câncer r, s ou t. É que os MECANISMOS que causam o surgimento dessas doenças estão sendo iniciados e/ou acelerados pela Proteína Spike.
Agora temos uma explicação satisfatória de como a proteína Spike pode induzir a “doença do príon”. É claro que mais estudos são necessários, mas espero que este artigo ajude outros pesquisadores a desenvolver estudos que se concentrem nesses mecanismos.
Fonte: https://wmcresearch.substack.com/p/the-spike-protein-and-prion-disease
O post A PROTEÍNA SPIKE E A “DOENÇA DO PRÍON”: REVELANDO UM MECANISMO CAUSAL apareceu primeiro em Planeta Prisão.